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新冠抗原檢測試劑可輔助評估新型冠狀病毒感染狀況和臨床診斷，實(shí)現(xiàn)對疑似人群進(jìn)行早期分流和快速管理，能較好地滿足疫情防控即時檢測、即時報告、及早發(fā)現(xiàn)的需求，有利于提高早發(fā)現(xiàn)能力，提高監(jiān)測預(yù)警靈敏度，降低檢測成本。

目前，市面上抗原檢測產(chǎn)品基本采用免疫層析技術(shù)。類似婦女檢測懷孕的驗(yàn)孕棒，是一種簡易而快速的檢測手段，無需要設(shè)備介入，居民在家就可以自行檢測，分鐘之間即可獲得結(jié)果，今天我們就來解析解析什么是免疫層析？

免疫層析技術(shù)是在20世紀(jì)80年代初在發(fā)達(dá)國家興起并被用于檢測血清蛋白的一種結(jié)合了免疫技術(shù)和色譜層析技術(shù)的快速檢測分析方法。

檢測原理：在層析時，標(biāo)記物與待測物的絡(luò)合物被相應(yīng)的配體捕獲而濃集顯色于硝酸纖維素膜上的檢測線，以纖維膜上顯色條帶的有無、顏色深淺和反射光線來定性或定量檢測結(jié)果。在即時檢測（POCT）中應(yīng)用極為廣泛。

免疫層析試紙條一般由樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖維素（NC）膜、檢測線（T線）、質(zhì)控線（C線）、吸水墊、聚苯乙烯（PS）底板等部分組成。

（圖片來源網(wǎng)絡(luò)）

根據(jù)待檢測物的大小和抗原抗體結(jié)合的方式，分為雙抗體夾心法、競爭法、間接法。雙抗體夾心法：主要檢測多抗原位點(diǎn)的生物大分子；競爭法：主要檢測半抗原、即不具備免疫原性的小分子化合物（如藥物、毒素、糖類等）；間接法：主要用于血清中抗體檢測，純化或者重組的抗原固定于NC膜上，標(biāo)記大多為蛋白A，如人狂犬病毒IgG檢測等。

根據(jù)標(biāo)記物質(zhì)的不同又可分為：有色測流層析、熒光測流層析、磁信號測流層析等。其中對應(yīng)的不同特性的標(biāo)記物大概有：有色納米顆粒（乳膠微球、膠體金、膠體碳、膠體硒）、熒光納米顆粒（時間分辨熒光、熒光微球、量子點(diǎn)、上轉(zhuǎn)換磷光）、磁性納米顆粒、脂質(zhì)體、稀土納米材料等。

下面，我們重點(diǎn)來講一講在獲證的新冠抗原檢測試劑中，膠體金、乳膠微球、熒光微球這3種標(biāo)記物分別有什么區(qū)別。

膠體金即膠體納米金，是由氯金酸(HAuCl4)在還原劑（如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等）作用下，聚合成一定大小的金顆粒，在靜電的作用下成為穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，形成帶負(fù)電的疏水膠溶液。膠體金標(biāo)記主要包括三種作用力，即靜電作用、疏水作用及金硫鍵。膠體金在弱堿環(huán)境下帶負(fù)電荷，可與蛋白質(zhì)分子的正電荷基團(tuán)形成牢固的結(jié)合。由于這種結(jié)合是靜電結(jié)合，所以不影響蛋白質(zhì)的生物特性。

乳膠法是以彩色乳膠微球作為載體的間接凝集試驗(yàn)。吸附可溶性抗原在其表面，特異性抗體與之結(jié)合后，產(chǎn)生凝集反應(yīng)。目前，常用的免疫層析用彩色微球多為采用內(nèi)部包埋法制備而得，染料處于微球內(nèi)部，不易泄露，有比較穩(wěn)定的形態(tài)結(jié)構(gòu)。

用于免疫層析產(chǎn)品中的彩色乳膠微球的粒徑比膠體金顆粒大（彩色乳膠微球粒徑在200nm-400nm，膠體金粒徑在20-40nm），相對靈敏度更高。

乳膠微球的顏色鮮艷，并且能夠包被氨基、羧基、硫基等多種官能團(tuán)，因此，既可以通過化學(xué)反應(yīng)形成共價鍵的形式偶聯(lián)抗體也可以通過吸附的方式偶聯(lián)抗體（膠體金僅可通過吸附的方式偶聯(lián)抗體）。對于含有多個硫原子類的分子，用乳膠微球的標(biāo)記效果更好。

膠體金法和乳膠法的操作流程基本類似，以雙抗夾心法為例：

雙抗夾心法演示（圖片來源網(wǎng)絡(luò)）

熒光微球是指將熒光物質(zhì)，比如熒光素，通過物理和化學(xué)等方法標(biāo)記在粒子的表面或包埋在微球內(nèi)部，一般為球形，直徑在納米到微米之間，受到激發(fā)光的激發(fā)可發(fā)出肉眼可見的熒光。

熒光微球形狀和大小相對穩(wěn)定，粒徑均勻、單分散性好、發(fā)光效率高、重復(fù)性好，與生物體之間相互作用后產(chǎn)生的各種反應(yīng)好，吸附性強(qiáng)、比表面積大、表面反應(yīng)能力強(qiáng)和凝集作用大等?；静皇芡饨绛h(huán)境的影響，熒光物質(zhì)的光學(xué)穩(wěn)定性較好，需要通過免疫熒光分析儀讀取熒光強(qiáng)度大小。熒光微球發(fā)射出來的熒光信號持續(xù)強(qiáng)而穩(wěn)定，易于用儀器檢測其熒光信號。

熒光免疫層析就是利用熒光微球表面修飾的功能基團(tuán)（如羧基）與抗原或抗體等共價結(jié)合，通過熒光物質(zhì)發(fā)出穩(wěn)定而強(qiáng)的熒光信號從而進(jìn)行定量檢測。

（圖片來源網(wǎng)絡(luò)）

總體來說，這3種免疫層析的標(biāo)記物各有千秋。膠體金法和乳膠法的特點(diǎn)在于不需使用特殊儀器，肉眼即可判斷，并且操作簡便、檢測時間短，其中乳膠法的顯色能力更強(qiáng)，結(jié)果顯示更直觀。熒光免疫層析法相較于膠體金法、乳膠法而言靈敏度更高，但在使用的時候均需要配套的熒光檢測器，目前沒有居家使用型，儀器價格高。另外，熒光微球的成本較之于膠體金、乳膠高，可及性偏差。

在新一輪的新冠疫情之下，新冠抗原檢測試劑的上市無疑大大方便了居民檢測，縮短了檢測時間，有利于提高早發(fā)現(xiàn)能力，并且新冠抗原檢測的成本比核酸檢測低。“抗原篩查+核酸診斷”的模式推廣，針對不同場景、不同適用人群，各自發(fā)揮作用，進(jìn)一步優(yōu)化新冠病毒檢測策略，服務(wù)疫情防控需求。

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